毛細(xì)管電泳儀工作原理

　　

　　毛細(xì)管電泳儀采用并行毛細(xì)管電泳（CE）與熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，能夠?qū)NA和RNA電泳分離檢測。毛細(xì)管列陣是并行毛細(xì)管電泳的基礎(chǔ)，根據(jù)毛細(xì)管列陣的毛細(xì)管數(shù)量分為96和12通道，每個毛細(xì)管首先注入可導(dǎo)電的分離膠，然后對毛細(xì)管兩端施加電場，96孔板中的預(yù)檢測樣品開始毛細(xì)管電泳。依據(jù)核酸片段長度不同在凝膠電泳中遷移速度不同的原理核酸樣品被分離檢測。

　　

　　毛細(xì)管電泳儀分析對進(jìn)樣技術(shù)要求很高，進(jìn)樣操作事項如下：

　　

　　一、進(jìn)樣區(qū)帶越小越好：

　　

　　無論采用何種進(jìn)樣方式，毛細(xì)管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細(xì)管總長度的1%～2%，以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細(xì)吸附進(jìn)入毛細(xì)管而影響進(jìn)樣量的性。樣品管中溶液少為5μL，進(jìn)樣體積為1～50nL。

　　

　　二、進(jìn)樣時間以短為宜：

　　

　　通常進(jìn)樣時間為0.5～1s，此時毛細(xì)管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。

　　

　　雖然毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣時間可至±0.1s，但由于毛細(xì)管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液，進(jìn)樣時間過短會影響分析的重復(fù)性。

　　

　　三、樣品預(yù)濃縮：

　　

　　受毛細(xì)管電泳儀毛細(xì)管內(nèi)總體積的制約，對于濃度很稀的樣品，毛細(xì)管電泳不能象HPLC那樣可加大進(jìn)樣量來提高檢測靈敏度，但可采取一些措施來改善。

　　

　　1、當(dāng)樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于（100倍以上）電泳緩沖液時，毛細(xì)管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場，使樣品溶液中的分子遷移的更快。當(dāng)這些分子到達(dá)電泳緩沖液邊界時，由于電場減弱，遷移速度減慢，使樣品區(qū)帶由寬變窄，濃度提高，而達(dá)到濃縮的目的。

　　

　　2、當(dāng)樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣，而樣品濃度較稀，不適合再作稀釋時，可在進(jìn)樣前先吸入一些水，也能達(dá)到濃縮的目的。

　　

　　無論采取何種進(jìn)樣方式，上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降，會導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。

　　

　　四、毛細(xì)管插入樣品溶液后，應(yīng)立即開始進(jìn)樣操作，完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象，引起誤差并使譜帶展寬。

　　

　　五、電極不要和毛細(xì)管接觸，樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。

　　

　　六、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度，而影響進(jìn)樣量的恒定。

　　

　　七、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶，前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。

　　

　　八、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。